Biomarker One Step SYBR Green RT-qPCR Kit

目錄：RK02012

規(guī)格：250 RXN (20 μL/RXN)

運(yùn)輸方式：干冰運(yùn)輸。

保存方式：-20?℃避光保存，本產(chǎn)品避免反復(fù)凍融。

百邁客推出的一步法RT-qPCR試劑盒（Biomarker?One Step SYBR Green RT-qPCR Kit），實(shí)現(xiàn)在同一個(gè)管中，一步完成從反轉(zhuǎn)錄到定量PCR的全部反應(yīng)。以RNA為模板，使用基因特異性引物，在BiomarkerScript?II One Step Enzyme Mix作用下，高效合成第一鏈cDNA。再以cDNA為模板，在2×One Step SYBR Green RT-qPCR?Buffer作用下，配合優(yōu)化的緩沖體系（緩沖體系中添加了有效抑制非特異性PCR擴(kuò)增的組分和提高擴(kuò)增能力的促進(jìn)因子），對(duì)高/低豐度的目的基因進(jìn)行精準(zhǔn)定量擴(kuò)增，該試劑盒重復(fù)性好，可信度高。

圖1：不同儀器所需ROX Reference Dye不同，請(qǐng)參考上述機(jī)型。

• 操作簡(jiǎn)單

  一次加樣，可完成cDNA合成和定量PCR實(shí)驗(yàn)，同時(shí)避免了樣本交叉污染。

• 靈敏度較高

  緩沖體系中添加了提高擴(kuò)增能力的促進(jìn)因子，可檢測(cè)低至10 pg的總RNA。

• 特異性較強(qiáng)

  預(yù)混液中添加了有效抑制非特異性擴(kuò)增的組分，可抑制引物二聚體的產(chǎn)生，定量更精準(zhǔn)。

• 卓越的擴(kuò)增性能

  良好的線性關(guān)系，擴(kuò)增效率高達(dá)99%，且重復(fù)性高。

• 適用所有機(jī)型

  試劑盒中有獨(dú)立包裝的的ROX I和ROX II、可用于校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差。

（以下RNA模板，均是用百邁客微量動(dòng)物組織RNA提取試劑盒提?。?/p>

1.靈敏度檢測(cè)：均以小鼠肝臟RNA為模板，設(shè)置不同的濃度梯效率可達(dá)99.1%，10 pg的RNA模板也完全可以擴(kuò)增。

圖2：以10 μg-10?pg小鼠肝臟總?RNA為模板，擴(kuò)增?GAPDH基因。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：線性范圍可達(dá)7個(gè)數(shù)量級(jí)，靈敏度可達(dá)?10?pg測(cè)分析。

2.重復(fù)性檢測(cè)：分別設(shè)置30個(gè)復(fù)孔，擴(kuò)增相同的基因，發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增曲線的Ct值幾乎一致。

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圖3：以100 ng小鼠肝臟總?RNA為模板，設(shè)置30個(gè)復(fù)孔，擴(kuò)增β-actin基因，擴(kuò)增重復(fù)率高。

3.物種多樣性檢測(cè)：分別以多種動(dòng)、植物的RNA為模板，進(jìn)行定量分析。發(fā)現(xiàn)所有的樣本對(duì)應(yīng)的目的完全片段，均成功擴(kuò)增出來(lái)。

圖4：物種多樣性檢測(cè)：分別以不同物種、不同濃度的RNA為模板，進(jìn)行一步法RT-qPCR擴(kuò)增。包括人肝癌（藍(lán)色）；果蠅（綠色）；小鼠腸道（黑色）；番茄果（紅色）；日本水稻（紫色）；辣椒（橙色）；石斑魚(yú)（灰色）。